ПЛР на хламідії – методика проведення аналізу

Сучасна медицина продовжує розвиватися в напрямку розробки не тільки нових методів лікування, але і діагностики захворювань. Бездоганно точні способи «впізнання» багатьох з них були відкриті дуже давно.

Але більшість потребує доопрацювання і удосконалення з-за великої кількості діагностичних помилок, обмежень за стадіями, на яких вони стають помітними для лікаря і обладнання, та інш. Тим більше це стосується патологій, відкритих або виділених в самостійне захворювання зовсім недавно.

Недоліки сучасних діагностичних систем позначаються на них особливо яскраво, ускладнюючи не тільки вивчення і збір статистики там, де зібрати нові дані потрібно в першу чергу, але і створення ліків проти них.

ПЛР на хламідії - методика проведення аналізу

Особливості захворювання

Хламідіоз є однією з інфекційних патологій, відкритих порівняно недавно – менше 30 років тому. Мова йде про зараження організму людини найпростішими – хламідіями.

По ідеї він повинен був би протікати по типу тріхомоноза, так як його збудник трихомонада багато в чому схожа з хламідією, але не тут-то було.

Виявилося, що хламідії – паразити куди більш потайливі, ніж трихомонади, але не менш небезпечні, особливо для репродуктивної функції організму.

І якраз їх здатність віртуозно ховатися (в прямому сенсі слова, так як вони розмножуються виключно всередині клітин, за їх мембраною) від усіх класичних методів діагностики колись сильно змістила терміни відкриття цієї патології. В цьому сенсі нові методи діагностики зразок ПЛР стали справжнім порятунком для науки, так як без них діагностика цілого ряду захворювань або зовсім неможлива, або видає неправильні результати набагато частіше, ніж хотілося б.

Інформативність ПЛР

ПЛР або, точніше кажучи, полімеразна ланцюгова реакція – це лабораторний метод діагностики, що дозволяє виявити в біологічних зразках, взятих у пацієнта, фрагменти сторонньої ДНК, що належить якому-небудь збудника. Зазвичай їх у взятому зразку не так вже й багато, з чим і пов’язана проблема стандартної діагностики.

Недостатня чутливість приладів дозволяє побачити тільки цілі, здорові мікроорганізми або антитіла до них, та й то якщо їх не упустить из виду обладнання або лаборант. Ну, а вже якщо ні один примірник збудника не потрапив в зразок, або антитіла до нього зовсім не виробляються імунітетом, результати аналізу виходять ложноотрицательными.

А ось ПЛР – це аналіз за досить точною методикою, оскільки вона дозволяє виділити із зразків найдрібніші сліди сторонніх організмів у вигляді фрагментів ДНК, яка, зрозуміло, не схожа з ДНК власних клітин тіла. Але оскільки тільки за цим «шматочках» визначити тип збудника неможливо, наступним етапом ПЛР стає прискорене розмноження знайденого матеріалу. І тільки коли його обсяг збільшується в кілька тисяч разів, лікар вже може сказати, яким болезнетворному організму він належить.

Що стосується хламідіозу, то це захворювання, що передається, до речі, далеко не тільки статевим шляхом (його можна підхопити і в зараженому ними водоймі), без точних методів діагностики могли б взагалі не виявити. Якби ця інфекція більш очевидною з точки зору симптомів або хоча б імунної реакції на неї, вона могла б стати відомою ще до середини ХХ століття.

Але чи не єдиний вірний її ознака – стійке, незрозуміле іншими факторами безпліддя. Тобто ознака дуже сумнівний, тому що безпліддя може наступати по сотні різних причин. Що до антитіл, то імунна захист таких не виробляє просто тому, що не помічає хламідії.

Ці найпростіші рідко виявляють себе, потрапляючи в міжклітинний простір, тому що розмножуються виключно всередині клітин. Хламідії і трихомонади не здатні самостійно витягувати енергію з їжі, і для цього їм потрібні «енергетичні станції» клітин – мітохондрії. А всередину клітин лейкоцитів доступу немає – туди здатні проникати виключно лімфоцити (імунні тіла лімфи). Тому зараження ними практично відсутні типові симптоми інфекції – воно не дає вираженого свербежу, ні запалення, ні підвищення температури та ін.

Зате хламідії рано чи пізно заражають яєчники у жінок і насінники у чоловіків, приводячи в повну, так би мовити, непридатність сперматозоїди, яйцеклітини і плаценту. А якщо навіть жінці випадково (в даному випадку це дійсно випадковість) пощастить завагітніти, чи їй вдасться виносити плід весь зазначений термін. Більш ніж у 80% випадків ця інфекція призводить до викиднів задовго до терміну навіть в 7 міс., починаючи з якого лікарі можуть ще спробувати «доростити» малюка в штучних умовах.

З усіх цих причин хламідіоз, ледве він увійшов в офіційний список захворювань, вже поспішили назвати «комерційним» діагнозом. Тобто патологією, настільки важко определимой, що медицина нерідко користується нею для призначення лікування (звичайно, не безкоштовного) навіть здоровим, нічим не інфікованим людям. А насправді, хоч варіант з помилковим призначенням і не варто виключати повністю, до недавніх пір це часто траплялося зовсім не з вини нечистого на руку лікаря, а з-за діагностичних помилок.

Як правильно сдавати аналіз ПЛР?

Отже, ПЛР як метод діагностики цінний тим, що він дозволяє точно встановити:

  • присутність в організмі збудників ще до появи перших симптомів захворювання;
  • наявність або відсутність прихованих інфекцій – не викликають реакції імунітету (вироблення спеціальних антитіл) або не дають властивих тільки їм симптомів;
  • тип збудника, навіть якщо при взяття зразка для аналізу не вдалося отримати жодного повного примірника його ДНК.

Але підвищена точність діагностики ПЛР є одночасно і її перевагою, і недоліком. Наприклад, зрозуміло, що якщо в відібраний для ПЛР зразок потрапить щось стороннє просто з навколишнього середовища (а бактерій в ній завжди вистачає), результат теж виявиться хибнопозитивним.

Аналогічно, ПЛР не відрізняє минулі інфекції від поточних. Тобто, якщо ми недавно перехворіли, і у взятому у нас зразку виявляться сліди вже зруйнованих імунітетом або антибіотиками тілець збудника, ми, знову-таки, отримаємо помилкове «спрацювання».

Тому ПЛР – це не аналіз калу, який зручніше і логічніше всього брати на дому, так як вимоги до нього пред’являються номінальні. Ми можемо взяти зразок забрудненим інструментом або помістити його в далеку від стерильності ємність. Плюс, потрібно враховувати, що його можна елементарно взяти не там, де потрібно і отримати відповідь, що ми цілком здорові, хоча насправді це далеко не так.

Так що зразки для ПЛР має право взяти тільки лікар, в умовах ідеальної стерильності.

Особливої підготовки він не вимагає, а здати аналіз має сенс у таких випадках:

  • У процесі планування вагітності у жінок – щоб згодом обійшлося без ускладнень і навіть викидня;
  • Вже після настання вагітності у жінки, щоб лікар міг своєчасно поставити майбутню маму та її дитину на особливий контроль у зв’язку з виявленням у неї хламідіозу і тим фактом, що при ньому вагітність не буває безпроблемним майже ніколи;
  • Якщо мазок з шкіри статевих органів містить домішки, характерні для сепсису, але не містить його конкретних збудників;
  • Якщо мазок містить багато збудників різних типів, включаючи умовно-патогенну мікрофлору. Для цієї патології типово ослаблення місцевого імунітету статевих шляхів, тому надто «брудний» мазок напевно зацікавить гінеколога.

Зазвичай аналіз ПЛР у жінок проводять саме шляхом взяття мазка з піхви.

Але розраховувати виявити там безпосередньо самих найпростіших ніхто всерйоз не розраховує, оскільки вони можуть жити тільки в клітинах тіла.

А виділення містять максимум залишкові сліди їх присутності – «осколки» ДНК загиблих з якихось причин хламідій. Оскільки заразитися хламідіозом можна не тільки статевим шляхом, ПЛР показаний до проведення в тому числі і у дітей. Наприклад, аналіз ПЛР у дітей беруть, якщо їх батькам був поставлений такий діагноз, дитина народилася у інфікованої матері або є підозра, що він просто підхопив його в громадському басейні, душовою та ін.

При цьому методологія його проведення у дітей будь-якого віку нічим не відрізняється від такої у дорослих. Так що, додаткові клопоти тут будуть пов’язані тільки з лікуванням хламідіозу у випадку, якщо результат виявиться позитивним.